武漢貝科新肽科技有限公司
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原位雜交第三天
1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時(shí)以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動(dòng)，室溫下顯色。
4）每隔一小時(shí)觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
植物染色體原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，它可以用來研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能。該技術(shù)利用DNA探針與目標(biāo)DNA序列的互補(bǔ)性結(jié)合，通過熒光或性標(biāo)記來檢測(cè)目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物染色體原位雜交技術(shù)的基本原理是將DNA探針標(biāo)記上熒光或性同位素，然后將其與目標(biāo)DNA序列進(jìn)行雜交。在雜交過程中，探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)結(jié)合，形成穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。隨后，通過熒光或性同位素探測(cè)技術(shù)，可以檢測(cè)到目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物原位雜交除了在遺傳育種方面的應(yīng)用，還在其他領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，包括：
植物基因研究：植物基因是一種利用基因工程技術(shù)來人類遺傳疾病的方法。通過植物原位雜交技術(shù)，可以將人類基因?qū)氲街参锛?xì)胞中，并在植物細(xì)胞中表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)，為基因提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
植物抗性研究：植物原位雜交技術(shù)可以用于研究植物對(duì)環(huán)境脅迫的抗性機(jī)制，例如抗旱、抗鹽、抗病等，有助于了解植物在環(huán)境脅迫下的生理和分子響應(yīng)機(jī)制。
植物比較研究：通過植物原位雜交技術(shù)可以比較不同植物之間基因表達(dá)模式的差異，從而為植物分類和進(jìn)化研究提供重要的參考依據(jù)。
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